在新冠疫情爆發的當口，進口水産品多次被檢查出新冠病毒核酸陽性，衆多水産平台都對此采取了“内采”、“價格下調”等措施，可以預見當前我國水産市場将出現持續低迷的情況。而在水産養殖病害防治方面，當前許多養殖戶對此方面的知識尚未完全掌握，操作不夠及時有效，為水産安全再次埋下隐患。而當前水産養殖常見傳染病害檢測技術尚不完善，存在檢測指标少、儀器成本高、檢測靈敏度低、單次檢測病原體種類少、檢測費用高、操作複雜、檢測時間長和檢測結果可讀性差等問題。本成果專注于水産病害快速檢測微芯片的研發與生産，其中微芯片主要基于PCR擴增、熒光探針技術,可以特異性檢測造成魚類、蝦類、蟹類以及藻類病害的病原菌類型，以便養殖企業迅速根據特定病原，對症下藥，減少養殖損失。本成果研制出一種病源基因檢測芯片，其經過特殊處理，病原特定基因序列能夠對病原物質進行定性和定量檢測，檢測速度極快，可在15分鐘内進行定性檢測，且本芯片易于攜帶，可通過現場采樣，簡單處理後直接将病樣滴在芯片上，方便易用。本成果的檢測原理主要是将單鍊寡核苷酸探針固定在膜上，以圖形的形式排布在支持性芯片基片上，對DNA模闆采用不對稱引物濃度擴增來完成單鍊PCR産物的擴增，再将單鍊PCR産物與芯片及反應液之間進行混合反應，而後根據反應後的顯色結果判斷病原的類型。相較于傳統芯片，本成果主要具有以下五點優勢：首先是靈敏度遠遠高于市場上同類型的産品，其次是檢測成本低，一次最多可以檢測48種病原體，大大降低了檢測費用；再者是相較于傳統芯片20多個步驟來說，本成果操作簡捷，隻有3~4步，便可輕松完成；全程曆經時間也擺脫了傳統芯片所需要的6小時，整個雜交步驟隻需10分鐘，大大縮短時間成本；最後則是本成果芯片可以直接通過肉眼讀取結果，不需要其他複雜儀器，設備成本顯著降低。而除了上述所提到的市場環境之外，本成果産品的出現，将大大滿足當前物聯網水體綜合實時監測市場、水體監測服務市場、水産養殖行業等多方的需求，具有廣大的市場發展前景。近期，項目組基于快速檢測技術平台，依次開發出南美白對蝦疫病、養殖淡水魚疫病、養殖海水魚疫病的快速基因檢測技術并推廣服務。

 

應用領域：養殖檢測

 

成果形式：新技術

 

技術指标：（1）同時檢測常見的魚類十種病毒性病原體；（2）設置鯉形目魚類正常對照，用于全程質控檢測過程；（3）肉眼直接可判讀結果/結合自動化儀器判讀；（4）擴增時間+芯片反應時間，共計約2小時左右；（5）穩定檢測出拷貝數不低于100 copies/μL的十種病原體及質粒樣本；（6）單管擴增，全程質控（擴增+芯片雜交）。

 

準确性：用本項目産品檢測已知病原體的陽性樣本，準确率≥99%；特異性：檢測陰性樣品，結果全部為陰性；檢測陽性樣本，結果全部為陽性；靈敏度：穩定檢測出不低于100 copies/μL的十種病原體或質粒DNA樣本；重複性：不同檢測條件下，能夠反複多次穩定檢出陽性樣本及陰性樣本。

 

創新點：(1)本成果檢測指标多，能夠建立基于通用引物的多重擴增體系，進行單一模闆多重同時擴增，是本成果的創新點。(2)基于各病原體基因的特點，本成果建立相應探針的成熟設計方案，能夠準确分别不同水産動植物病原體，是本成果的創新點。（3）在實際引物序列設計中，發現部分RNA病毒指标，型别多，序列差異較大，設計高擴增效率引物有一定難度。

 

成熟程度：成熟

 

合作方式：技術開發、技術咨詢、技術服務